Как проводится и что показывает иммуноферментный анализ?

Метод лабораторной диагностики, основанный на взаимодействии "антиген-антитело" называется иммуноферментным анализом (ИФА). Это позволяет выявлять белковые вещества, такие как ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей. В настоящее время современная диагностика невозможна без ИФА и других высокочувствительных лабораторных анализов.

В прежние времена врачи вынуждены были опираться на косвенные признаки болезни и проводить длительные микроскопические исследования в целях определения возбудителя инфекции. Сегодня всего один тест, такой как иммуноферментный анализ, может подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз, что значительно облегчает процесс диагностики.

Суть иммуноферментного анализа состоит в реакции "антиген - антитело".

Антиген – это молекула, чужда организму, которая обычно является белком и может попасть в организм человека вместе с инфекционным агентом. Кроме того, чужеродные кровеносные частицы, несовместимые с группой крови человека, также могут быть антигенами.

Антигены могут вызывать иммунную реакцию в организме, направленную на защиту внутренней среды от посторонних веществ. В ответ человеческий организм синтезирует специальные вещества – антитела (иммуноглобулины), которые способны соединяться с антигенами по принципу "ключ в замок", образуя иммунные комплексы. Такие комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета. Именно на этой реакции основан принцип иммуноферментного анализа.

Показатели, которые нужно проанализировать

Один из классов иммуноглобулинов, IgM, может указывать на наличие острого инфекционного процесса в организме. Если IgM отсутствует, то это может быть связано либо с отсутствием конкретного возбудителя в организме, либо с тем, что инфекция перешла в хроническую стадию.

Если тест на IgM даёт отрицательный результат, но есть IgA, то это часто свидетельствует о реинфекции, хронической или скрыто протекающей инфекции.

Положительные результаты обнаружения как IgA, так и IgM говорят о том, что острая фаза заболевания находится в самом разгаре.

Наличие IgG может указывать на то, что заболевание перешло в хроническую стадию, либо на то, что организм начал вырабатывать иммунитет к инфекционному агенту после выздоровления.

Возможные результаты ИФА

Отчетливые данные, отображаемые в виде таблицы, являются частой формой представления результатов анализа ИФА. Эти данные могут включать в себя перечисление всех антител или антигенов, с указанием результатов теста, отрицательных или положительных. Они также могут содержать количественный показатель, который указывает на количество антител в образце. Такой показатель может быть отрицательным, слабоположительным, положительным или резко положительным.

Еще один количественный показатель - индекс авидности антител, выраженный в процентах. Если индекс выше, это указывает на то, что инфекционный процесс длится дольше.

ИФА – это один из тех анализов, которые помогают, при самых разных патологиях, обнаружить специфические антитела и антигены. Существует тысячи различных видов тест-систем ИФА, поэтому этот метод используется в большинстве медицинских отделений. Результаты ИФА позволяют определить правильный диагноз и назначить оптимальную терапию, что обеспечивает эффективное лечение заболевания.

Классификация видов антител

Антитела имеют несколько различных разновидностей, каждая из которых выполняет свою функцию на разных стадиях иммунного ответа. Первыми антителами, которые синтезируются в ответ на проникновение антигена в организм, являются иммуноглобулины класса M (IgM). Эти антитела достигают наибольшей концентрации в первые дни инфекционного процесса.

За ними следуют иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до окончательной победы над инфекцией. Кроме того, IgG продолжает циркулировать в организме, обеспечивая иммунитет к повторному инфицированию. Благодаря вакцинации, которая включает в себя ослабленные антигены микробов и вирусов, в крови появляются большие количества IgG. При контакте с реальной угрозой эти антитела быстро подавляют инфекцию до того, как она сможет навредить здоровью.

Кроме IgM и IgG, существуют и другие виды антител, такие как иммуноглобулины класса A (IgA), которые содержатся в больших количествах в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму, и иммуноглобулины класса E (IgE), которые борются с паразитарными инфекциями. В лабораторной диагностике чаще всего используются IgM, IgG и IgA: по уровню концентрации этих антител можно определить, на какой стадии инфекционного процесса находится организм, а также узнать, было ли у человека когда-либо то или иное заболевание (например, краснуха или ветряная оспа).

Иммуноферментный анализ, или ИФА, назначается врачами, если они подозревают определенную инфекцию или если нужно измерить концентрацию определенного гормона. Он помогает определить, какие антигены или антитела присутствуют в организме человека.

Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или антитела, если нужно найти антиген). Образец биологической жидкости (обычно это сыворотка крови) вводится в лунки. Затем происходит или не происходит образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать вывод о результате анализа.

ИФА может быть качественным и количественным. В первом случае ответ будет однозначным: либо искомое вещество найдено, либо нет. В случае количественного анализа цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека. Это поможет понять, как развивается инфекционный процесс.

Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Однако, проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории. В 1971 году учеными был изобретен ИФА, который оказался безопасным альтернативным способом идентификации реакции.

Какие плюсы имеет иммуноферментный анализ?

Иммуноферментный анализ (ИФА) применяется в лабораторной диагностике и имеет несколько преимуществ, которые делают его более точным и эффективным для выявления заболеваний. Вот некоторые из них:

• Высокая чувствительность. ИФА позволяет обнаружить искомое вещество, даже если его концентрация в образце очень низкая.
• Высокая специфичность. Диагностика с помощью ИФА безошибочная - если результат положительный, значит, найдены именно те антитела или антигены, которые предполагались, а не другие.
• Раннее выявление заболевания. ИФА заменил бактериологический метод диагностики, который был достаточно затратным и сложным. Определение IgM с помощью ИФА позволяет точно диагностировать заболевание уже в первые дни его проявления.
• Минимальный процент ошибок. Использование иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Результат анализа считается точным, так как большинство тестовых систем и реактивов для ИФА производятся в промышленных условиях.

Метод ИФА, несмотря на его точность, имеет некоторые недостатки. Для его проведения необходимо знать, что именно искать - врач должен иметь представление о характере заболевания. Поэтому случайный тест в надежде на угадывание диагноза не имеет смысла.

Кроме того, при диагностировании инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может обнаружить возбудителя и определить его конкретные свойства. Он только указывает на наличие антител в крови у пациента, что косвенно свидетельствует о наличии чужеродного микроорганизма в организме.

Стоит отметить, что ИФА является достаточно точным, но не самым дешевым методом диагностики. Поэтому использование метода должно быть обоснованным, а интерпретацией результатов должен заниматься опытный врач.

Выявляемые заболевания и показания к назначению ИФА анализа

Имеется огромный список показаний к проведению ИФА анализа. Ниже представлены наиболее часто встречающиеся цели анализа:

• Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний. В этом случае проводится анализ на наличие IgM и IgG антител к различным вирусам, в числе которых гепатиты A, B, C, D и E, ВИЧ, цитомегаловирусная инфекция, вирус Эпштейна — Барр, герпес и токсоплазмоз. Также ИФА проводится для выявления IgM и IgG антител к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим инфекциям, а также для выявления IgG антител к паразитарным заболеваниям и IgM и IgG антител к инфекциям, передающимся половым путем. Еще одним показанием является анализ на IgG к хеликобактерной инфекции.
• Оценка наличия маркеров некоторых аутоиммунных заболеваний.
• Выявление онкологических маркеров, таких как простатспецифический антиген, раково-эмбриональный антиген и др.
• Определение содержания гормонов в сыворотке крови, включая прогестерон, пролактин, тестостерон, тиреотропный гормон и другие.

Один из основных биоматериалов, используемых для ИФА (иммуноферментного анализа) - сыворотка крови. Из образца крови, взятого из вены пациента, в лаборатории удаляются форменные элементы, которые могут затруднять проведение анализа. В случае диагностики других заболеваний, таких как инфекции, анализ проводится с использованием спинномозговой жидкости, околоплодных вод, мазков слизистых оболочек и т.д.

Для получения точных результатов рекомендуется сдавать кровь натощак. Если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний, за две недели до тестирования следует отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов. Такие меры помогают избежать возможных искажений в результатах анализа.

Как быстро получить результаты ИФА?

Для того чтобы получить результат анализа ИФА (иммунноферментного анализа) необходимые реактивы и хорошо организованная работа в лаборатории. Обычно результат может быть готов в течение одного или двух суток после взятия крови. Если требуется получить экстренный ответ, то в некоторых случаях время ожидания может быть сокращено до двух или трех часов.

Пояснительной информацией по иммуноферментному анализу (ИФА) является, что его качественный результат сохранит однозначный ответ, который сообщит, найдено ли искомое вещество в образце или же нет. Если речь идет о количественном анализе на основе ИФА, то концентрацию можно выразить численным значением или в виде соответствующего количества знаков "+" (которых может быть от одного до нескольких).

Фото: freepik.com